细胞内钙浆液是调节细胞活动的重要第二信使,其浓度的变化会影响细胞的生长、分化、程序细胞死亡等多种生理活动。使用钙调节性荧光指示剂如Fura-2或Fura-FF,细胞内钙浓度的变化会导致指示剂荧光强度的变化。利用LS55荧光分光光度计检测,可算得细胞内钙浓度。
主要原理:
在细胞内加入荧光钙指示剂,例如苯基相关化合物如Fura-2。 这种荧光剂在焦点平面上被激发后会发出荧光,且其荧光强度与细胞内钙离子浓度成反比。
当细胞内钙浓度升高时,荧光剂与钙形成配合物,荧光强度降低。 通过LS55测量不同激光波长下(340nm和380nm)的荧光强度(通常是510nm), 可以计算出细胞内钙浓度。
具体步骤:
将细胞贴片加入含有荧光钙指示剂的溶液中孵育,使荧光剂进入细胞内。
将贴片装载到LS55光学系统内,分别以340nm 和 380nm激光波长激发。
记录不同波长下荧光强度,根据校正曲线计算出细胞内钙浓度。
利用药物或细胞刺激,触发细胞内钙的释放,实时记录钙浓度的变化。
数据计算软件也可同时分析细胞内不同区域钙浓度的差异。
优点:
灵敏度高,能检测细胞内钙的微量变化。
实时性好,能实时监测细胞内钙浓度的动态变化。
空间分辨率高,能区分不同细胞内部的钙浓度差异。
系统成熟,操作简单。
LS55荧光分光光度计可以用于检测细胞内钙的变化。是最常见的检测方法,灵敏度高,高通量,能实时观察细胞内钙的动态变化。
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