食用油中胆固醇定量分析 液相色谱法 简单 快捷 准确测定

胆固醇是动物性食物中常见的成分，而人类过多食用胆固醇则会引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病以及风湿性关节炎、癌症、糖尿病和帕金森等相关疾病。需要控制饮食中胆固醇的摄入，因此建立一种准确而行之有效的胆固醇含量的测定方法是十分必要的。

目前，有关食品中胆固醇的测定方法主要有比色法、薄层层析法、气相色谱法、高效液相色谱法及酶法，皂化法等。这些方法都可以完成胆固醇的检测，但这些方法都存在着操作繁杂、误差大、重现性差等问题。目标物含量低导致分析结果不理想，而采用凝胶渗透色谱法（GPC）对样品进行前处理，可以有效解决上述问题。

凝胶渗透色谱法采用惰性多孔材料为固定相，利用空间排阻效应将分子大小不同的物质分离，达到制备纯化的目的。本文采用全自动凝胶净化系统，提取目标物胆固醇，用高效液相色谱仪进行测定，从而建立一个简单，快捷，准确的食用油中胆固醇的测定方法。

【仪器设备】

1. 八通道自动凝胶渗透色谱仪Surwit Eight GPC
2. 凝胶渗透色谱柱
3. LC-10Tvp二元高压梯度高效液相色谱系统
4. 旋转蒸发仪

【试剂】

1. 胆固醇标品（99%）
2. 甲醇（HPLC）
3. 乙酸乙酯（分析纯）
4. 环己烷（分析纯）
5. 石油醚（分析纯）
6. 水（超纯水）

标样和样品处理：

标准溶液配制：

• 精密称取胆固醇标样 0.500 g 置于 50 mL 容量瓶中，用乙醇溶解并定容，配成 10.0 mg/mL 的胆固醇储备液。更低浓度的混合标准溶液用乙醇溶液逐级稀释。所有标准溶液均置于冰箱中 4℃保存备用。
• 样品提取方法分别取 0.5g 食用油于 2 个样品瓶中，一个用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂定容至 5ml 作为样品空白试剂，另一个加入 3 mL 标准溶液后再用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂溶解样品，用于后续的凝胶净化。
  

凝胶渗透净化：

• 凝胶渗透色谱柱
• 流动相：等体积的乙酸乙酯和环己烷混合溶液，流量：5 mL/min；
• 紫外检测波长254nm；
• 收集8～16min馏分于60mL试剂瓶中，然后在40℃，150 rpm条件下旋转蒸发至干，加入5 mL乙醇溶解，供HPLC检测。

色谱条件：

• 色谱柱： C18 (250mm × 4.6mm)；
• 流动相为 100%的乙醇；流速 1.0 mL/min；
• 进样量 20 µL；
• 紫外检测波长 208nm。

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