分光光度计测定碱性磷酸酶活性 为临床工作提供有利依据

碱性磷酸酶(ALP)主要存在于骨、肝、肾等处，是一种水解酶。碱性磷酸酶活性是衡量人(或动物)组织和体液中ALP含量的一个重要指标，它与骨和肝病以及肿瘤之间有密切关系。

检测碱性磷酸酶活性主要用来辅助诊断骨、肝、肿瘤等疾病，评价新陈代谢变化和营养情况，监测治疗过程和效果，提示肾功能等方面的信息，有利于指导临床工作。分光光度法是测定碱性磷酸酶(ALP)活性的主要方法。

碱性磷酸酶可以催化如下反应：

磷酸酯+H2O→酚醇+Pi

其中Pi代表待解脱的无机磷酸根。

碱性磷酸酶的活性代表了该酶催化该反应的能力。即用以表示碱性磷酸酶将其底物(如磷酸酯)水解为产物(如酚醇和无机磷酸根)的速率。

分光光度法测定ALP活性的主要步骤：

• 将样品混有反应底物4-氮基苯基-2-磷酸(pNPP)，碱性磷酸酶作用能将pNPP水解为黄色的4-氮基苯酚(pNP)。
• 在400nm波长下利用分光光度计测量不同时间点产生的pNP的浓度，由此计算出ALP活性。

主要原理：

pNPP水解生成的pNP具有吸收峰在400nm处，且与浓度成正比。通过测量不同时间点pNP的吸光度变化，可以计算出碱性磷酸酶的活性。

主要注意事项：

• 确保试剂和样品温度稳定；
• 采用胆鹅鲜酶作为活性参比物；
• 分光光度计应经过校准方可使用；
• 时间间隔越短越能掌握ALP的即时活性。

总的来说，分光光度法有以下优点：

• 操作简便，时间短；
• 结果稳定可重复；
• 测量敏感度高。

分光光度法操作最为简单，测量精度和灵敏度较高，是目前应用最广泛的方法。

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