用荧光分光光度计检测ROS 检测原理

ROS(类激素活性氧)是细胞中常见的代谢产物，主要包括超氧阴离子(O2-)、水去氧基物(OH-)、过氧化氢(H2O2)等。在细胞代谢和生理过程中扮演多重角色，适量的ROS参与细胞生理活动，过高的ROS会引起细胞氧化损伤。检测细胞ROS含量可以了解细胞代谢状态和氧化应激情况。

荧光分光光度计是一种敏感灵活的方法，可用来检测细胞内ROS。主要是采用荧光染料的方法。

检测原理：

选择合适的荧光染料如DCFH-DA，与细胞共孵育使其被吸收，随后在适当的激发波长下，测量细胞发出的荧光强度，间接反映细胞内ROS含量。

主要步骤：

选择合适的荧光染料

比如DCFH-DA(2'，7'-二氯荧光亮氨酸)可以被细胞吸收，在细胞内脱乙酰基后变为二氯荧光亮氰酸，可与ROS反应产生荧光。

核磁共振光度计测量

将染料与待测细胞共孵育，让细胞吸收染料并产生荧光。使用荧光分光光度计，设置体外部给出的荧光峰值波长，测量细胞发光强度。

通过计算内标准曲线，确定ROS浓度

建立不同ROS标准品的荧光强度与浓度的标准曲线，根据待测细胞的荧光强度，可通过曲线计算出细胞内ROS浓度。

重复测量以提高精度

主要优点是灵敏度高、操作简单、定量测定能力强。主要注意细胞生理状态、荧光染料浓度等，才能获得可比结果。

注意事项：

荧光分光光度计确实是一种敏感灵活的方法，可用于检测细胞内ROS。主要依赖选择合适的荧光探针，并粗制标准曲线进行定量分析。