食用油脂中辣椒素含量的测定 采用液相色谱-串联质谱仪检测食用油安全

近几年来，地沟油的概念常见于新闻报道，一时间，各种鉴定地沟油的方法逐渐展开。本文采用了液相色谱-串联质谱测定方法，本方法适用于食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的测定。

方案详情：

原理
试样经二氯甲烷溶解，氢氧化钠水溶液提取酸化后，过固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。

试剂：

• 乙腈（CH，CN）：色谱纯
• 甲醇(CH,OH):色谱纯
• 甲酸（CHO2）：质谱级。
• 二氯甲烷（CHCL）：色谱纯。
• 氢氧化钠（NaOH）：分析纯。
• 浓硫酸（H，SO4）： 98%，分析纯

溶液配制：

1. 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（3.1.3） 1mL用水定容至1000 mL，用滤膜（0.22 um，水相）过滤后备用。
2. 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（3.1.3） 1 mL用乙腈（3.1.1）定容至1000 mL，用滤膜（0.22pm，有机相）过滤后备用。
3. 2%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠（3.1.5）溶于1000 mL水中，摇匀备用。
4. 稀硫酸（1+15）溶液：取10 mL浓硫酸（3.1.6）缓缓倒入150 mL水中，搅拌均匀备用。

标准品：天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品。

标准溶液配制：

标准储备液：分别称取天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品（3.3）0.1g（精确至0.0001g），用甲醇（3.1.2）溶解，并转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为1mg／mL。贮存于4℃冰箱中，有效期3个月。

混合标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液（3.4.1）适量于容量瓶中，用甲醇（3.1.2）将其稀释成含量分别为0.1 ng／mL、0.2 ng／mL、0.5ng／mL、1ng／mL、5ng／mL、10ng／mL、50ng／mL 和100ng／mL的标准系列混合工作液。临用时配制。

C18 固相萃取（SPE）小柱：1000mg，6mL，或等效SPE柱。

仪器配置：

1. 高效液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源。
2. 超声波清洗器
3. 分析天平：感量为0.000 1 g。
4. 离心机：转速≥4000 r/min。
5. 涡旋混合器

试样制备：
准确称取1 g（精确至0.000 1 g）样品于10 mL具塞塑料试管中，加入1 mL二氯甲烷，再加入3 mL 2%氢氧化钠溶液，涡旋提取10 min，4000 r/min离心10 min，取上层水相；残留有机相再用3 mL 2%氢氧化钠溶液重复提取一次，合并水相，再用稀硫酸溶液调节pH至2-3之间后进行固相萃取操作。C18 SPE小柱预先用3 mL乙腈淋洗3次，再用3 mL纯水淋洗2次进行活化，然后将调节完pH值的水相提取液加入小柱，控制流速至每秒1-2滴，待全部溶液通过SPE小柱后，以3 mL超纯水淋洗2次，弃去流出液，最终以3 mL乙腈洗脱2次。乙腈洗脱液50℃氮吹近干，用0.5 mL甲醇溶解后过微孔滤膜（0.22 μm，有机相），过滤液置于进样小瓶内衬管中供LC-MS/MS测定。

色谱条件：

• 色谱柱：C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者；
• 流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B为0.1%甲酸乙腈溶液（3.2.2）
• 流速：0.3 mL/min；
• 柱温：40 ℃；
• 进样量：2 μL。

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