分光光度计测定蛋白浓度 千铺金法

蛋白浓度(Protein concentration)指样品中蛋白质(Protein)含量的多少，通常用mg/ml或μg/ml表示。它是描述样品中蛋白质含量大小的一个量，反映了样品中蛋白分子的浓度大小。如果样品的蛋白浓度高，则说明其中含有较多的蛋白分子。

大多数实验需要根据蛋白的量或浓度来确定其它实验试剂的用量。通过测定蛋白的浓度，我们可以准确确定实验的起始量和浓度，为后续的蛋白实验提供参考与依据。

分光光度计可以用来测定样品中的蛋白质含量，主要方法是采用千铺金法。千铺金(Coomassie Brilliant Blue)是一种酸性染料，能在酸性环境下与蛋白有特殊亲和力结合。并且结合效果与蛋白质浓度正相关。

分光光度测定蛋白浓度主要步骤：

制备标准曲线：选取一定浓度(0.1mg/ml 或 0.2mg/ml)的牛血清白蛋白(BSA)作为标准品，做不同浓度(通常为5个浓度)的标准液。

将标准液与待测样品加入含有千铺金的溶液中，孵育并进行染色。

用分光光度计在595nm波长下测量标准液和待测样品的吸光度值。

根据标准曲线推算出待测样品的蛋白浓度。

需要注意的事项：

千铺金与蛋白结合后形成的粒子不溶于丁醇，因此可以通过与丁醇共浸被千铺金染色后的标准溶液和样品溶液，使测量结果更精确。

为减少试验误差，标准曲线和待测样品的处理过程程序应保持一致。

595nm波长为千铺金与蛋白最大吸收峰，所以选择该波长的吸收度最大。

其他方法还有 Lowry 蛋白定量法， Bradford 蛋白定量法，并不局限于千铺金法。分光光度计主要提供精确的吸光度测定以用于计算结果。

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